1999年在电影《公鸡打鸣，母鸡下蛋》中闫妮主演女村长，这是她第一次出演女一号，导演尚敬从中看到了闫妮的喜剧才华，请她客串了《炊事班的故事》。 2003年，尚敬执导电视情景轻喜剧《健康快车》，闫妮在其中出演了两个角色，其中一角为护士严文秀。 2005年拍摄的一部情景喜剧《武林外传》使闫妮迅速地被全国观众认识和喜爱。 2007年，出演电视剧《大明王朝1566》，闫妮在剧中饰演知书达礼的裕王李妃。 2009年一部火爆大江南北的《北风那个吹》，一个唯一被载入中国电视剧历史年鉴的女性角色――牛鲜花，让闫妮两年之内获六大电视剧盛典最高奖项，并获中国电视剧飞天奖和金鹰奖。 2009年，主演张艺谋导演的电影《三枪拍案惊奇》，闫妮在片中饰演风情万种却有智谋有胆量，敢爱敢恨的老板娘；2010年闫妮凭借这部电影走上柏林电影节的红地毯。这部影片是2009年最受大众关注的华语电影，影片极具争议与卖座。2009年3月19日，主演的首部反映中国三峡大移民的电视剧《国家行动》开播，闫妮在剧中饰演峡江县县委书记向云秀；12月28日，出演的电视剧《铁齿铜牙纪晓岚4》开播，闫妮在剧中饰演格格葛松儿。 2010年1月2日，主演的国内首部工业题材剧《奠基者》开播，闫妮在剧中饰演将军余秋里的夫人刘素阁；2月21日，主演的都市生活轻喜剧《三七撞上二十一》开播，闫妮在剧中饰演邓佑真；4月15日，主演的电视剧《张小五的春天》开播，闫妮在剧中饰演有勇有谋有情有义的女包工头张小五；6月14日，主演的国内首部反映刑满释放人员生活的现实题材电视剧《永不回头》开播，闫妮在剧中饰演刑释人员王朝东的妻子何丽萍 。同年主演大型绿色家庭情景喜剧《乐活家庭》和《乐活家庭2》，闫妮在剧中饰演知性达观、才貌双全的小区咖啡店老板娘。 2011年，主演电影版《武林外传》，闫妮在片中饰演风情万种的女掌柜佟湘玉；主演港式喜剧《最强喜事》，闫妮在剧中饰演时尚化妆品公司的总监Dream ；主演电影《画壁》，闫妮在片中饰演外刚内柔的仙境中女儿国的统治者“姑姑”；主演新春贺岁巨制电影《大魔术师》，闫妮在片中饰演刘青云的三姨太，在“戏中戏”里，一人分饰两角。电影均取得了过亿的票房佳绩，闫妮被媒体评为华语影坛性价比最高的演员之一。出演古装武侠巨制《楚留香传奇》；主演青春魔幻喜剧《开心魔法》，饰演的是排球“魔鬼教练”刘华丽。 2012年，主演都市情感剧《亲爱的》，闫妮在剧中饰演印刷厂“厂花”李宝莉，并且首次挑战30年龄跨度；同年主演电视剧《煮妇也疯狂》，闫妮在剧中饰演热心善良、性格直爽的都市时尚美女大厨阿琴；同年主演电影《形影不离》，闫妮在片中饰演妩媚性感的御姐领导阳总；同年主演大型革命战争剧《女子军魂》，闫妮在剧中饰演个性彪悍的八路军营长凌凤侠；同年客串情景喜剧《大学生士兵的故事2》，闫妮在剧中饰演的卫生队心理医生。 2014年3月19号，主演的电视剧《一仆二主》开播，闫妮在剧中饰演事业成功的女总裁唐红，该剧占据卫视电视剧收视排行榜冠军；5月22日，主演的现实主义都市情感大戏《生活启示录》开播，闫妮在剧中饰演开朗率真的于小强。创造了2014年最高收视率2.387%，截至4月3日，网上播放量累积超过7亿次。截至4月7日，网络播放量11.6亿，截至5月24日，网络播放量20.48亿。6月6日，主演电影《疯狂72小时》上映，闫妮在片中饰演了继承千万古董家产的女土豪兼女神经病许三娜。 2015年4月2日，主演的谍战悬疑剧《王大花的革命生涯》开播，闫妮在剧中饰演由朴实“村花”成长为一名合格的女战士，造型百变的“卧底女特工”的王大花；5月27日，主演的都市情感喜剧《前夫求爱记》开播，饰演不婚主义律师鲍小蕾；7月15日，主演的奇幻爆笑巨制《捉妖记》上映，饰演多年求子不得的老板娘骆冰；9月29日，主演的青春热血军旅偶像大剧《青春集结号》开播，闫妮在剧中饰演心理医生闫教员。 2016年，参加央视猴年春晚，并表演了开场歌舞《春到福来》；2月1日，主演的贺岁电影《过年好》上映，闫妮饰演事业型女强人李羊朵；5月12日，主演都市情感经侦大剧《爱的追踪》开播，闫妮在剧中饰演历经商海浮沉而霸气横生的女强人文皓；6月29日，主演电影《反转人生》上映，闫妮在片中饰演CBD土地娘上官芙蓉；9月8日，主演的都市家庭电视剧《太太万岁》开播，闫妮在剧中饰演事业型女性叶舒心；12月16日，参演的电影《罗曼蒂克消亡史》上映，闫妮在片中饰演一个乱世上海很有腔调的管家“王妈”；12月30日，主演的喜剧电影《情圣》上映，闫妮在片中饰演热情似火的美艳霸道女总裁马丽莲。 2017年，主演爱情电影《美容针》，闫妮在片中饰演知性的人气女作家李棠珍；7月2日，出演的年度情感治愈大剧《复合大师》开播，闫妮在剧中饰演拥有多重身份的顾小意；7月26日，主演军旅战争题材电视剧《绝密543》开播，闫妮在剧中饰演司务长马老柴的妻子赵盈秋。 2018年5月11日，主演的电影《迷妹“罗”曼史》上映。9月，受邀参加2018年中央广播电视总台中秋晚会。10月，与靳东、陈晓、黄志忠、秦岚、赵立新等主演由沈严、刘海波联袂执导的电视剧《人民的财产》。 2019年2月4日，2019年中央广播电视总台春节联欢晚会，闫妮与周一围、吴海龙、张维威、沈月、李栋、李佳旭表演小品《办公室的故事》。 6月9日，领衔主演的都市家庭剧《少年派》登陆湖南卫视金鹰独播剧场播出。9月24日，由李少飞执导的电视剧《我待生活如初恋》官宣，闫妮在剧中饰演蔡素芬，与张嘉译继《少年派》后再度合作。