1993年，辛柏青考入中央戏剧学院表演系。 1995年，参演首部电视剧《走进阳光》。1997年进入中国国家话剧院，演出《九九归一》、《红岩》、《致命邂逅》等作品。 2000年，出演首部电影《因为有爱》。2001年，参演话剧《理查三世》 ，饰演克莱伦斯。 2005年10月，与孙俪、邓超合作主演电视剧《幸福像花儿一样》，出演第二男主角林彬。 2007年参演话剧《红玫瑰与白玫瑰》，饰演佟振保同年，领衔主演谍战电视剧《雪狼》，饰演化名“雪狼”的地下工作者刘栋梁。 2008年，参演电影《万家灯火》，与吴越在剧中出演一对夫妻。 2009年12月，主演的电视剧《成家立业》播出，辛柏青饰演执着于艺术的二哥许志洋，一头过肩长发颠覆了他以往出演的居家好男人形象。 2010年，参演话剧《四世同堂》，饰演大汉奸冠晓荷，凭借《四世同堂》在2012年全国戏剧文化奖话剧金狮奖颁奖盛典中斩获中国话剧界最高奖项金狮奖表演奖 ；12月，主演电视剧《老马家的幸福往事》，该剧荣获第28届中国电视剧飞天奖长篇电视剧三等奖。 2011年4月，参演电视剧《幸福密码》，辛柏青在剧中颠覆形象，以搞笑耍贫嘴的折腾男面目出镜。 2012年，在话剧《青蛇》中饰演法海，凭借话剧《青蛇》获得时尚影响力大典2013年度戏剧类最佳男演员奖；同年参演电视剧《媳妇的美好宣言》 。 2014年，参演电视剧《跟我回家》。 2015年，电视剧《为了一句话》热播，辛柏青饰演名叫“百顺”却事事不顺的杨百顺一角。 2016年，在热播的电视剧《养个孩子不容易》中饰演韩超。12月，主演电视剧《家族荣誉》，在剧中饰演黄家老二的儿子黄漂。 2017年，在电视剧《美好生活》中饰演了以为心理医生边志军。 2019年11月6日，出演的卫国战争电视剧《河山》播出；12月20日，出演的都市律政剧《精英律师》在东方卫视、北京卫视首播，并在爱奇艺、腾讯视频同步播出。 2020年，出演张律执导的电影《柳川》。