2000年，苗圃参演电视剧《百姓》，2003年苗圃获得国际人口联盟（PCI）的邀请，赴美参加美国电视节，并出席艾美奖颁奖典礼，成为内地女演员获此殊荣第一人。 2001年，苗圃被导演张建栋相中，在电视剧《绝对控制》中饰演楚晓明。演完之后便签约“冯小刚工作室”。 2003年，苗圃被冯导推荐到电视剧《五月槐花香》剧组。同年参演《绝对控制》，其中她塑造了“中国第一警花”，从此奠定了“四小青衣”的地位。 2004年，苗圃拍摄了《求求你，表扬我》，之后和吴宗宪合拍古装喜剧《猜心妙手》。 2005和张国立、王刚、张铁林合作电视剧《五月槐花香》，同年苗圃就曾凭借该角色入围了飞天奖最佳女演员奖，2007年凭借该剧又入围金鹰奖。 2005年拍摄的电影《雪花那个飘》也在戛纳电影节上露面。 2006年与孙红雷主演的央视大戏《范府大院》，以孙红雷和苗圃两个范府的仆人为主线，展现一个大家族在历史民族动荡中的盛衰史。 2007年和日本演技男星中井贵一合作了电影《凤凰》，又在影片《樱桃》中挑战演技，扮演一个智障母亲。同时她主演的电视剧《我们俩的婚姻》、《女人的选择》播出。 2008年，在电影《证人》中扮演张家辉的植物人妻子，又在导演阿甘的新片《高兴》中作为配角演出。2009年苗圃则主演两部荧屏作品《闯关东2》和《走西口》。 2009年6月参与录制减法生活主题曲《最美的星球》，与韩红、陈晓东、杨坤、陈楚生、李霞等14位明星联袂演唱。同年为祖国60华诞录制歌曲《我的中国我爱你》由苗圃、侯耀华、黄渤、庞龙、姜超、金巧巧、关凌、汪正正、吕薇、王铮亮、张大礼、谢楠、李琛等艺人联袂献唱。 2010年苗圃与张家辉通过电影《线人》再续前缘，并在电影《一不留神》中首次出演反面角色，饰演一个为了谋取他人钱财而装神弄鬼的女骗子。 2011年底参与录制电影频道《首映》慈善晚会主题曲《因为爱 相信爱》。同年苗圃主演的古装传奇大戏《穆桂英挂帅》。同年在电影《真心话大冒险》中，苗圃饰演一位女跆拳道教练。 2012年参与录制奥运歌曲《北京祝福你》。 2015年出演东方神话魔幻电视剧《修仙记之何仙姑传》，饰演何仙姑。 2017年4月18日出演民国年代电视剧《桃花依旧笑春风》，饰演贺桃花。 2018年8月30日出演年代谍战电视剧《冬蛾》，饰演刘玉蛾。 2019年11月，主演电视剧《鹤唳华亭》。